免疫染色の達人が答えるトラブル解決Q&A100

【目次】
序文

第1章　事前の検討：手法の選択
Q1　器具は何を揃えればよいのでしょうか？
Q2　固定に関して，常に灌流固定を選択したほうがいいのでしょうか？
Q3　染色に用いる抗体の説明書に「凍結切片とパラフィン切片の両方が対応」と記載されているときはどちらを選択すればよいでしょうか？
Q4　ゼノグラフト組織でヒトとマウスの細胞を染め分けることは可能でしょうか？
Q5　マウスにヒト細胞を移植した組織で，ヒト由来のタンパク質のみを検出したいです
Q6　培養細胞を染色したいのですがどんな方法がありますか？

第2章　切片作製まで：解剖～固定
Q7　固定液はみんなが使っている4％パラホルムアルデヒドでいいですよね？
Q8　免疫染色用の組織の固定を4℃で行う方法もあると聞いたのですが，室温と比べてどちらがよいのでしょうか？
Q9　灌流固定が上手くなるポイントを教えてください
Q10　灌流固定後の浸漬固定の時間は，どのくらいがよいのでしょうか？
Q11　ホルマリン以外の固定液を使用しても染色できますか？
Q12　最近話題のグリオキサール固定液について，他の固定液との違いや選択方法などを教えてください
他

第3章　切片の前処理：脱脂・脱灰，包埋，薄切
Q18　パラフィン包埋は一般的ないわゆる病理用の方法でよいのでしょうか？
Q19　エタノール～キシレン，パラフィンへの置換時間の目安を教えてください
Q20　灌流固定を行った組織片を凍結切片にするにはどうすればよいですか？
Q21　各工程の作業環境の温度は何℃がよいですか？
Q22　ブロックの薄切時は冷やして切った方がよいですか？
Q23　スライドの種類にはどのようなものがありますか？ どう使い分けますか？
他

第4章　染色工程：抗体選び，染色法
1）抗体関連
Q33　目的の抗体がいろいろなメーカーから販売されていて，探し方と選び方がわかりません
Q34　同じクローンのモノクローナル抗体が複数の会社から販売されているときはどのような基準で選択すればよいのでしょうか？
Q35　検体と一次抗体の産生動物を変える理由は何ですか？
他

2）染色工程関連
Q44　染色工程ってどれくらいの時間がかかりますか？
Q45　冷蔵・冷凍していたブロックや切片を用いて作業するとき，どのように温度を戻せばよいのでしょうか？
Q46　分子病理は行わずHE染色のみの場合，切片の保存温度は室温でよいのでしょうか？
他

3）蛍光染色関連
Q68　同じ分子を発色と蛍光で観察したとき，見え方はどう違いますか？
Q69　蛍光法で二重染色を行う際の一次抗体の選び方について教えてください
Q70　蛍光観察を行う際は何色が良いですか？
他

4）その他の染色
Q81　蛍光免疫染色の後に周辺組織の情報を得る方法はありますか？
Q82　TUNEL染色の注意点を教えてください
Q83　線維化の評価方法について教えてください

第5章　結果の評価：検出感度，バックグラウンド，染色ムラ，画像解析・定量
Q84　初心者がやりがちなミスについて教えてください
Q85　ネガティブコントロール抗体でも色がついてしまいます
Q86　染まるブロックと染まらないブロックがあり，サンプル間のばらつきで困っています
Q87　はじめて行う染色なのですがシグナルが全く出ません．どこを確認すべきでしょうか？
Q88　今まで染まっていた系なのに染まらなくなってしまいました
Q89　非特異的発色を減らすにはどうすればよいですか？
他

索引